PCR em análise de DNA

Departamentos de polícia, promotores e laboratórios criminais em todo o mundo aproveitaram o poder da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) para ajudar na investigação de cenas de crimes.A PCR auxilia na construção de perfis de DNA, que funcionam como um “código de barras” único para cada indivíduo, tornando este um dos grandes exemplos onde a biologia e a tecnologia se fundem para resolver problemas sociais.

COMO SOMOS DIFERENTES?

Após a conclusão do Projeto Genoma Humano, foi determinado que o genoma é composto por aproximadamente 3 milhões de bases.Destes, cerca de 99,5% são idênticos em todos os humanos, o que implica que, afinal, não somos tão diferentes.

A variação que observamos e que faz com que cada um de nós pareça único é revelada principalmente devido a diferenças no número de sequências repetidas para regiões específicas do genoma.Destas regiões, a Repetição Curta em Tandem (STR) foi identificada e é a repetição mais comumente usada (usando 13 loci ou regiões) em aplicação atualmente.

PERFIL DE DNA ATRAVÉS DE STR

O STR é composto pela repetição de 3-4 bases de nucleotídeos encontradas em diferentes loci do genoma humano.Cada indivíduo herda duas cópias, ou alelos, de seus pais, portanto, um perfil STR poderia ser construído.

Para diferentes populações, vários loci têm sido utilizados como padrão na identificação de indivíduos.Para corresponder aos perfis STR, os números repetidos para cada alelo devem ser os mesmos.Por exemplo, no locus D3S1358 (ver Figura 1), se a amostra obtida tiver um perfil STR nesse locus de 7,5, então o suspeito B já está excluído para corresponder à amostra obtida.Se os perfis dos alelos corresponderem, a probabilidade será calculada dependendo da frequência do alelo para o local específico.Isto implica que o suspeito não é automaticamente a fonte definitiva da amostra quando os perfis STR coincidem.

Bancos de dados também foram criados para auxiliar no processo de investigação, como o Sistema Combinado de Índice de DNA (CODIS), mantido pelo FBI dos EUA.

PCR NO FLUXO DE TRABALHO DE PERFIL DE STR

1. As investigações partem da coleta de materiais biológicos como dentes, cabelos, ossos e fluidos da cena do crime.
2. As amostras são então transferidas para o laboratório forense para processamento adicional, onde o DNA é extraído das amostras (~1 ng de amostra é adequado para PCR).

3. Os loci STR específicos são direcionados e amplificados através de PCR.Os fragmentos de PCR são posteriormente analisados ​​através de sequenciamento ou eletroforese.

4. Os perfis STR são então gerados e, se disponíveis, verificados com perfis ou bases de dados suspeitos.
O perfil STR requer termocicladores robustos para auxiliar no processo de investigação.São necessários resultados confiáveis ​​da experimentação em laboratório úmido para ajudar os departamentos de polícia e os promotores em seus relatórios.A Esco Lifesciences oferece termocicladores com excelentes taxas de aquecimento e resfriamento, temperatura precisa e uniforme para garantir perfis STR confiáveis.