Diretrizes laboratoriais para detecção de infecção pelo vírus da varíola dos macacos

O Diretor-Geral da Organização Mundial da Saúde (OMS) declarou o crescente surto global de varíola dos macacos uma Emergência de Saúde Pública de Importância Internacional (PHEIC) em 23 de julho de 2022. De acordo com a OMS, existem mais de 35.000 casos em 92 países/territórios, e 12 mortes em 17 de agosto. A maioria dos casos relatados (com histórico de viagens) viajou para áreas da Europa e América do Norte.

A varíola dos macacos é uma doença rara causada pela infecção pelo vírus da varíola dos macacos (MPXV) – um vírus de DNA de fita dupla envelopado que pertence à mesma família de vírus que causa a varíola.Este vírus pode ser transmitido através do contato com fluidos corporais, lesões na pele ou superfícies mucosas internas com sintomas como febre, dor de cabeça e dores musculares.O período de incubação da varíola dos macacos é geralmente de 6 a 13 dias, mas pode variar de 5 a 21 dias (cerca de três semanas).
De acordo com a OMS, as melhores amostras de diagnóstico são obtidas diretamente da erupção cutânea, fluido ou crostas, ou biópsia, quando viável.Outros métodos, como a detecção de antígenos e anticorpos, podem não ser úteis, pois não distinguem entre ortopoxvírus.

Recomenda-se uma abordagem baseada no risco na manipulação das amostras de casos suspeitos, prováveis ​​ou confirmados de varíola dos macacos no laboratório.Portanto, os procedimentos para detecção da presença do MPXV, classificado como patógeno do grupo de risco 3, devem ser realizados em laboratório de Nível de Biossegurança 2, utilizando a lista de equipamentos abaixo.

Guia de equipamentos para detecção do vírus Monkeypox

Armazenamento de amostras e reagentes

As amostras MPXV são recomendadas para refrigeração entre 2°C e 8°C ou devem ser congeladas (-20°C ou menos) dentro de uma hora após a coleta.Se o tempo de transporte exceder sete dias, as amostras devem ser armazenadas a -20°C ou menos.Entretanto, recomenda-se -70°C para armazenamento de amostras a longo prazo (>60 dias a partir da colheita).

Os refrigeradores de laboratório, freezers de laboratório e freezers de temperatura ultrabaixa da Biobase são equipados com sistemas de refrigeração bem projetados e materiais de alta qualidade adequados para armazenamento de amostras biológicas sensíveis à temperatura que requerem condições críticas de armazenamento.

Manuseio e preparação de amostras

O MPXV pode ser transmitido durante a fase de processamento da amostra devido a material contaminado ou métodos inadequados.Como resultado, devem ser observadas medidas de biossegurança aumentadas.Antes da inativação da amostra, as amostras de pacientes com suspeita de MPXV devem ser preparadas em uma cabine funcional de biossegurança Classe II;no entanto, isto não é necessário para amostras devidamente inativadas.

Além da proteção que os gabinetes de biossegurança fornecem, os gabinetes de segurança biológica Biobase Classe II são compatíveis com NSF 49 e EN 12469 com recursos fáceis de usar e são revestidos com pó antimicrobiano em todas as suas superfícies pintadas externas e internas para maior segurança.Centrífugas são necessárias para a separação dos componentes líquidos e sólidos da amostra.Copos de segurança ou rotores selados são recomendados se forem essenciais para o procedimento.

Detecção e Análise

O teste de amplificação de ácidos nucleicos (NAAT) é realizado para confirmar a infecção por MPXV.Para detectar sequências únicas de DNA viral, é usada PCR em tempo real ou reação em cadeia da polimerase convencional (PCR).Existem duas etapas envolvidas na detecção de vírus.A primeira PCR detecta ortopoxvírus, mas não identifica as espécies, enquanto a segunda PCR (ou sequenciamento) detecta especificamente o MPXV.

Um termociclador de PCR em tempo real fornece amplificação eficiente de ácidos nucleicos para análise de vírus.A Biobase oferece os novos termocicladores Swift™ PCR com um computador integrado para operação autônoma a partir de entrada, monitoramento e análise do programa PCR.